Alfa-komplementasi: Perbedaan antara revisi
Konten dihapus Konten ditambahkan
Tidak ada ringkasan suntingan |
k +fact, mengubah file -> berkas |
||
Baris 14:
==Struktur Enzim β-Galaktosidase==
[[File:LacZ2.jpg|right|thumb|400px|''lacZ'', gen yang menyandikan beta-galaktosidase]]
Enzim β-galaktosidase terdiri atas 146 [[asam amino]] yang terbagi dalam 4 subunit.{{fact}} Bagian yang dekat dengan ujung 5’ pada gen lacZ mengkodekan subunit α yang berfungsi dalam proses [[tetramerisasi]] yaitu proses pembentukan struktur 3 dimensi [[protein]] tersebut, sementara itu bagian yang dekat dengan ujung 3’ pada lacZ mengkodekan [[sisi aktif]] enzim tersebut.{{fact}} Keempat subunit β-galaktosidase harus berkumpul untuk membentuk satu enzim yang fungsional).<ref name=sAttwood>{{citation
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications
|first1=Z. F.
Baris 25:
|isbn=012147370}}
</ref> <ref name=Langley_1975>Langley KE,Villarejo MR,Fowler AV,Zamenhof PJ,Zabin I.1975.''Molecular Basis of β-Galactosidase α-Complementation''.Proc NAT Acad Sci.'''(72)''':1254-1257</ref>
==Bagian yang terlibat dalam alfa-komplementasi==
===''lacZ'''===
[[
'''Gen ''lacZ'''''' merupakan gen yang hanya mengandung subunit α pada [[β-galaktosidase]] tetapi tidak mengandung gen yang menyandikan [[sisi aktif]] enzim tersebut.{{fact}} Hal tersebut diakibatkan karena gen ''[[lacZ]]'' yaitu gen yang menyandikan β-galaktosidase merupakan gen yang cukup besar jika ditaruh seluruhnya di dalam [[vektor]] [[plasmid]], oleh sebab itu, dalam vektor plasmid hanya terkandung sebagian dari gen yang menyandikan β-galaktosidase untuk menjaga ukuran plasmid agar tetap kecil.<ref name=sAttwood>{{citation
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications
|first1=Z. F.
Baris 44 ⟶ 41:
|isbn=012147370}}
</ref>
===''lacZ∆M15''===
[[
Gen ''lacZ∆M15'' adalah gen penyandi β-galaktosidase yang terdapat pada DNA kromosom bakteri yang telah mengalami [[delesi]] sebanyak 90 pasang basa pada sekuens yang dekat dengan ujung 5’.{{fact}} Hal tersebut mengakibatkan subunit α pada enzim β-galaktosidase kehilangan 30 asam amino sehingga tidak dapat melakukan [[tetramerisasi]] yaitu yang berhubungan dengan pelipatan protein sehingga enzim ini menjadi tidak fungsional.<ref name=sAttwood>{{citation
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications
|first1=Z. F.
Baris 63 ⟶ 55:
|isbn=012147370}}
</ref>
==Mekanisme==
Gen lacZ dalam proses [[kloning]] DNA berfungsi sebagai gen pelapor, yaitu gen yang ekspresinya bergantung pada masuk atau tidaknya insert pada vektor kloning.{{fact}} Hal ini disebabkan karena adanya [[MCR]] (Multiple Cloning Site) diantara gen penyandi β-galaktosidase.{{fact}}
===Tidak terdapat insert pada vektor kloning===
lacZ akan di[[transkripsi]] secara normal dan dapat membentuk α-complementaion menjadi β-galaktosidase yang dapat memecah [[X-gal]] menjadi [[galaktosa]] dan turunan [[indoksil]].{{fact}} Turunan tersebut selanjutnya akan dioksidasi sehingga membentuk turunan dibromo-dikloro yang menyebabkan berubahnya warna [[koloni]] menjadi biru.<ref name=Nichol>{{citation
|title=An Introduction to Genetic Engineering
|last1=Nichol
Baris 86 ⟶ 73:
===Terdapat insert pada vektor kloning===
Akan terdapat tambahan gen insert yang ikut ditranskripsi oleh [[RNA polimerase]].{{fact}} Hal tersebut menyebabkan gen tersebut tidak dapat membentuk enzim β-galaktosidase yang fungsional dan X-gal tidak akan dipecah sehingga koloni yang dihasilkan tetap berwarna putih.<ref name=Nichol>{{citation
|title=An Introduction to Genetic Engineering
|last1=Nichol
|