Alfa-komplementasi: Perbedaan antara revisi

Enzim β-galaktosidase terdiri atas 146 [[asam amino]] yang terbagi dalam 4 subunit.{{fact}} Bagian yang dekat dengan ujung 5’ pada gen lacZ mengkodekan subunit α yang berfungsi dalam proses [[tetramerisasi]] yaitu proses pembentukan struktur 3 dimensi [[protein]] tersebut, sementara itu bagian yang dekat dengan ujung 3’ pada lacZ mengkodekan [[sisi aktif]] enzim tersebut.{{fact}} Keempat subunit β-galaktosidase harus berkumpul untuk membentuk satu enzim yang fungsional).<ref name=sAttwood>{{citation

[[FileBerkas:LacZ'.jpg|right|thumb|300px|''lacZ''', gen yang menyandikan beta-galaktosidase yang hanya mengandung subunit α(terdapat pada vektor plasmid)]]

'''Gen ''lacZ'''''' merupakan gen yang hanya mengandung subunit α pada [[β-galaktosidase]] tetapi tidak mengandung gen yang menyandikan [[sisi aktif]] enzim tersebut.{{fact}} Hal tersebut diakibatkan karena gen ''[[lacZ]]'' yaitu gen yang menyandikan β-galaktosidase merupakan gen yang cukup besar jika ditaruh seluruhnya di dalam [[vektor]] [[plasmid]], oleh sebab itu, dalam vektor plasmid hanya terkandung sebagian dari gen yang menyandikan β-galaktosidase untuk menjaga ukuran plasmid agar tetap kecil.<ref name=sAttwood>{{citation

[[FileBerkas:LacZ∆M15 .jpg|right|thumb|400px|''lacZ∆M15'', gen yang menyandikan beta-galaktosidase yang telah mengalami delesi pada subunit α nya(terdapat pada [[DNA]] [[kromosom]] [[bakteri]])]]

Gen ''lacZ∆M15'' adalah gen penyandi β-galaktosidase yang terdapat pada DNA kromosom bakteri yang telah mengalami [[delesi]] sebanyak 90 pasang basa pada sekuens yang dekat dengan ujung 5’.{{fact}} Hal tersebut mengakibatkan subunit α pada enzim β-galaktosidase kehilangan 30 asam amino sehingga tidak dapat melakukan [[tetramerisasi]] yaitu yang berhubungan dengan pelipatan protein sehingga enzim ini menjadi tidak fungsional.<ref name=sAttwood>{{citation

Gen lacZ dalam proses [[kloning]] DNA berfungsi sebagai gen pelapor, yaitu gen yang ekspresinya bergantung pada masuk atau tidaknya insert pada vektor kloning.{{fact}} Hal ini disebabkan karena adanya [[MCR]] (Multiple Cloning Site) diantara gen penyandi β-galaktosidase.{{fact}}

lacZ akan di[[transkripsi]] secara normal dan dapat membentuk α-complementaion menjadi β-galaktosidase yang dapat memecah [[X-gal]] menjadi [[galaktosa]] dan turunan [[indoksil]].{{fact}} Turunan tersebut selanjutnya akan dioksidasi sehingga membentuk turunan dibromo-dikloro yang menyebabkan berubahnya warna [[koloni]] menjadi biru.<ref name=Nichol>{{citation

Akan terdapat tambahan gen insert yang ikut ditranskripsi oleh [[RNA polimerase]].{{fact}} Hal tersebut menyebabkan gen tersebut tidak dapat membentuk enzim β-galaktosidase yang fungsional dan X-gal tidak akan dipecah sehingga koloni yang dihasilkan tetap berwarna putih.<ref name=Nichol>{{citation