Kromatografi fasa terbalik: Perbedaan antara revisi

'''Kromatografi fasa terbalik (English: ''' ({{lang-en|reversed-phase chromatography}}, RPC'') atau kromatografi hidrofobik adalah metode [[kromatografi]] yang menggunakan [[fasa diam]] [[hidrofobik]].<ref>[[International Union of Pure and Applied Chemistry|IUPAC]]<span>, </span>''[[:en:Compendium_of_Chemical_TerminologyCompendium of Chemical Terminology|Compendium of Chemical Terminology]]''<span>, 2nd ed. (the "Gold Book") (1997). </span>Online corrected version:  (2006–) "[http://goldbook.iupac.org/R05376.html reversed-phase chromatography]".</ref> RPC merujuk pada kromatografi cair, bukan [[kromatografi gas]].

Teknik ini diperkenalkan menggunakan rantai [[alkil]] yang berikatan kovalen pada fasa pendukung, menciptakan fasa diam [[hidrofobik]] yang mempunyai afinitas yang lebih kuat terhadap senyawa-senyawa hidrofobik. Penggunaan fasa diam hidrofobik diperhitungkan sebagai lawan atau "kebalikan" dari kromatografi fasa normal, sehingga muncullah istilah "kromatografi fasa terbalik".<ref name="Mehta">Akul Mehta (December 27, 2012).  "[http://pharmaxchange.info/press/2012/12/principle-of-reversed-phase-chromatography-hplcuplc-with-animation/ Principle of Reversed-Phase Chromatography HPLC/UPLC (with Animation)]". PharmaXChange. Retrieved  10 January  2013.</ref><ref>I Molnár and C Horváth (September 1976).  "[http://www.clinchem.org/content/22/9/1497.short Reverse-phase chromatography of polar biological substances: separation of catechol compounds by high-performance liquid chromatography]".  ''Clinical Chemistry''  '''22'''  (9): 1497–1502.  [[PubMed|PMID]]  [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8221 8221].</ref> Kromatografi fasa terbalik melibatkan fasa gerak polar ([[aqueous]]). Akibatnya, molekul-molekul hidrofobik cenderung teradsorpsi pada fasa diam hidrofobik, dan molekul-molekul hidrofilik dalam fasa gerak akan melewati kolom dan terelusi lebih dulu.<ref name="Mehta" /><ref>(Clinical Biochemistry, T.W.Hrubey, 54)</ref>  Molekul-molekul hidrofobik dapat dielusi dari kolom dengan menurunkan polaritas fasa gerak menggunakan [[Pelarut|pelarut organik]] (non-polar), yang dapat mengurangi interaksi hidrofobik. Semakin hidrofobik suatu molekul, semakin kuat terikat pada fasa diam, dan semakin tinggi konsentrasi pelarut organik yang diperlukan untuk mengelusi molekul tersebut.

Segala bahan non-polar inert yang dapat memenuhi syarat pengemasan dapat digunakan dalam kromatografi fasa terbalik. Kolom paling populer adalah rantai karbon oktadesil (C18) yang terikat pada silika (klasifikasi USP: L1). Tersedia 297 jenis kolom ini secara komersial.<ref>''USP Chromatographic Reagents 2007-2008: Used in USP-NF and Pharmacopeial Forum''. United States Pharmacopeia. 2007.</ref> Urutan berikutnya adalah kolom Si-C8 (L7 - 166 kolom), silika murni (L3 - 88 kolom), Si-siano (L10 - 73 kolom), dan Si-fenil (L11 - 72 kolom). Perlu dicatat bahwa C18, C8 dan fenil adalah resin yang didedikasikan khusus untuk fasa terbalik, sementara kolom siano dapat digunakan dalam mode fasa terbalik tergantung pada kondisi fasa gerak dan analitnya. Perlu dicatat bahwa tidak semua kolom C18 mempunyai sifat retensi yang identik. [[Gugus fungsi]] pada permukaan silika dapat bekerja dalam reaksi monomerik maupun polimerik dengan organosilan rantai pendek yang digunakan dalam tahapan menutup gugus silanol (''end-capping''). Meskipun secara keseluruhan mekanisme retensinya tetap sama, sedikit perbedaan kimia permukaan untuk fasa diam yang berbeda akan membuat perubahan dalam selektivitasnya.

Campuran air atau larutan penyangga dalam air dan pelarut organik digunakan untuk mengelusi analit dair kolom fasa terbalik.<ref name="Mehta" /> Pelarut harus dapat campur dengan air, dan pelarut organik yang umum digunakan adalah asetonitril, metanol, dan [[tetrahidrofuran]] (THF). Pelarut lain yang dapat digunakan antara lain etanol atau 2-propanol (isopropil alkohol). Elusi dilaukandilakukan secara isokratik (komposisi air-pelarut tidak beruah selama proses pemisahan) atau menggunakan larutan gradien (komposisi air-pelarut berubah selama proses pemisahan, biasanya dengan menurunkan polaritas). pH fasa gerak memiliki peran penting dalam retensi analit dan selektivitasnya dapat diubah untuk analit-analit tertentu.

* [http://www.gelifesciences.com/handbooks Hydrophobic Interaction and Reversed Phase Chromatography Principles and Methods Handbook] {{Webarchive|url=https://web.archive.org/web/20081205061748/http://www.gelifesciences.com/handbooks |date=2008-12-05 }}