Kromatografi kolom: Perbedaan antara revisi

'''Kromatografi kolom''' adalah metode yang digunakan untuk memurnikan [[bahan kimia]] tunggal dari campurannya. Metode ini sering digunakan untuk aplikasi preparasi pada skala mikrogram hingga kilogram. Keuntungan utama kromatografi kolom adalah biaya yang rendah dan kemudahan membuang [[fasa diam]] yang telah digunakan. Kemudahan pembuangan fasa diam ini mencegah kontaminasi silang dan degradasi fasa diam akibat pemakaian ulang atau daur ulang.

 

 

== Fasa diam ==

''Fasa diam'' atau ''adsorben'' (penjerap) dalam kromatografi kolom adalah zat padat. Fasa diam yang paling umum untuk kromatografi kolom adalah [[silika gel]], diikuti dengan [[alumina]]. Serbuk [[selulosa]] pernah banyak digunakan. Kromatografi kolom memungkinkan melakukan teknik [[kromatografi pertukaran ion]], [[kromatografi fasa terbalik]], [[kromatografi afinitas]], atau [[penjerapan bed ekspansi]] ({{lang-en|expanded bed adsorption, EBA}}). [[Fasa diam]] biasanya serbuk halus atau gel dan/atau mikropori untuk peningkatan permukaan, meskipun dalam EBA digunakan bed berfulida. Ada rasio penting antara berat fasa diam dan berat kering campuran analit yang dapat diaplikasikan ke dalam kolom. Untuk kolom silika, rasio berada antara 20:1 hingga 100:1, bergantung pada kedekatan jarak elusi antar komponen analit.<ref>[http://www.reachdevices.com/SetUpColumn.html Setting up a flash chromatography column]</ref>

 

Ada [[Laju alir volumetrik|laju aliran]] optimum untuk masing-masing pemisahan. Semakin cepat [[Laju alir volumetrik|laju aliran]] eluen akan meminimalkan waktu yang dibutuhkan untuk melalui kolom sehingga meminimalkan difusi, menghasilkan pemisahan yang lebih baik. Namun, laju aliran maksimum perlu dibatasi karena analit memerlukan waktu tertentu untuk berada pada kesetimbangan antara fasa diam-fasa gerak, lihat [[persamaan Van Deemter]]. Kolom laboratorium sederhana bekerja dengan prinsip aliran [[gravitasi]]. Laju aliran kolom semacam ini dapat dinaikkan dengan menambah eluen baru di bagian atas fasa diam, atau diturunkan dengan mengatur keran di bagian bawah. Laju aliran yang lebih cepat dapat diperoleh dengan menggunakan pompa atau gas bertekanan (misalnya: udara, [[nitrogen]], atau [[argon]]) untuk menekan pelarut melalui kolom (kromatografi kolom kilat).<ref>Still, W. C.; Kahn, M.; Mitra, A. ''[[:en:J. Org. Chem.|J. Org. Chem]].'' '''1978''', ''43(14)'', 2923-2925. ([[Pengenal objek digital|doi]]:[[doi:10.1021/jo00408a041|10.1021/jo00408a041]])</ref><ref name="HarwoodMoodyEOCPAP">Laurence M. Harwood, Christopher J. Moody (13 Jun 1989). ''Experimental organic chemistry: Principles and Practice'' (Illustrated ed.). pp. 180–185. [[ISBN]] [[:en:Special:BookSources/978-0-632-02017-1|978-0-632-02017-1]].</ref>

 

 

Telah dikembangkan lembar lajur (''spreadsheet'') yang mendukung suksesnya pengembangan kolom kilat. Lembar lajur memperkirakan volume retensi dan pita volume analit, jumlah fraksi yang diperkirakan untuk masing-masing kandungan analit, dan resolusi antara dua puncak yang berdekatan. Informasi ini memungkinkan pengguna memilih parameter optimal untuk pemisahan berskala preparatif sebelum dicobakan pada kolom kilat.<ref>Fair, J. D.; Kormos, C. M. ''[https://en.wiki-indonesia.club/w/index.php?title=J._Chromatography._A&action=edit&redlink=1 J. Chromatography]. A'' '''2008''', ''1211''(1-2), 49-54. ([[Pengenal objek digital|doi]]:[[doi:10.1016/j.chroma.2008.09.085|10.1016/j.chroma.2008.09.085]])</ref>

 

== Sistem otomasi ==

Kromatografi kolom adalah tahapan yang sangat memakan waktu dalam laboratorium apapun, dan dapat berubah menjadi suatu proses leher botol dalam sekejap. Oleh karenanya, beberapa pabrikan seperti Buchi, Interchim dan Teledyne Isco telah mengembangkan sistem otomasi kromatografi kilat (biasanya dirujuk sebagai KCTR, kromatografi cair tekanan rendah ({{lang-en|low pressure liquid chromatography, LPLC}}) dengan tekanan antara 350–525 kPa atau 50,8–76,1 psi, yang meminimalisir keterlibatan manusia dalam proses pemurnian. Sistem otomasi meliputi komponen-komponen yang secara normal ditemukan dalam sistem yang lebih mahal [[kromatografi cair kinerja tinggi]] (KCKT) seperti pompa gradien, port injeksi sampel, detektor UV, dan pengumpul fraksi untuk mengoleksi eluen. Biasanya, sistem otomatis ini dapat memisahkan sampel mulai beberapa miligram hingga skala industri kilogram, dan menawarkan solusi yang lebih murah dan cepat untuk melakukan injeksi multipel pada sistem KCKT-preparasi.

 

 

== Perhitungan resolusi kromatogram ==

Ada juga kromatografi kolom yang dilengkapi dengan pompa peristaltik, mengalirkan dapar dan larutan sampel melalui bagian atas kolom. Larutan dan dapar mengalir melalui kolom hingga mencapai pengumpul fraksi di bagian akhir kolom untuk mengumpulkan sampel yang terelusi. Sebelum mencapai pengumpul sampel, sampel yang dielusi dari kolom melewati suatu detektor seperti [[spektrofotometer]] atau [[spektrometer massa]] sehingga konsentrasi sampel yang sudah dipisahkan dalam campuran dapat ditentukan.

 

'''Resolusi (R_s):'''

 

 

 

t_RB = waktu retensi solut B