Kromatografi fasa terbalik: Perbedaan antara revisi

Kromatografi fasa terbalik (English: ''reversed-phase chromatography, RPC'') atau kromatografi hidrofobik adalah metode [[kromatografi]] yang menggunakan [[fasa diam]] [[hidrofobik]].<ref>[[International Union of Pure and Applied Chemistry|IUPAC]]<span contenteditable="false">, </span>''[[:en:Compendium_of_Chemical_Terminology|Compendium of Chemical Terminology]]''<span contenteditable="false">, 2nd ed. (the "Gold Book") (1997). </span>Online corrected version:  (2006–) "[http://goldbook.iupac.org/R05376.html reversed-phase chromatography]".</ref> RPC merujuk pada kromatografi cair, bukan kromatografi gas.

Teknik ini diperkenalkan menggunakan rantai [[alkil]] yang berikatan kovalen pada fasa pendukung, menciptakan fasa diam [[hidrofobik]] yang mempunyai afinitas yang lebih kuat terhadap senyawa-senyawa hidrofobik. Penggunaan fasa diam hidrofobik diperhitungkan sebagai lawan atau "kebalikan" dari kromatografi fasa normal, sehingga muncullah istilah "kromatografi fasa terbalik".<ref name="Mehta"><cite class="citation web" contenteditable="false">Akul Mehta (December 27, 2012). "[http://pharmaxchange.info/press/2012/12/principle-of-reversed-phase-chromatography-hplcuplc-with-animation/ <Principle of Reversed-Phase Chromatography HPLC/cite>UPLC (with Animation)]". PharmaXChange. Retrieved 10 January 2013.</ref><ref><cite class="citation journal" contenteditable="false">I Molnár and C Horváth (September 1976). "[http://www.clinchem.org/content/22/9/1497.short <Reverse-phase chromatography of polar biological substances: separation of catechol compounds by high-performance liquid chromatography]". ''Clinical Chemistry'' '''22''' (9): 1497–1502. [[PubMed|PMID]] [https:/cite>/www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8221 8221].</ref> Kromatografi fasa terbalik melibatkan fasa gerak polar ([[aqueous]]). Akibatnya, molekul-molekul hidrofobik cenderung teradsorpsi pada fasa diam hidrofobik, dan molekul-molekul hidrofilik dalam fasa gerak akan melewati kolom dan terelusi lebih dulu.<ref name="Mehta" /><ref>(Clinical Biochemistry, T.W.Hrubey, 54)</ref> Molekul-molekul hidrofobik dapat dielusi dari kolom dengan menurunkan polaritas fasa gerak menggunakan pelarut organik (non-polar), yang dapat mengurangi interaksi hidrofobik. Semakin hidrofobik suatu molekul, semakin kuat terikat pada fasa diam, dan semakin tinggi konsentrasi pelarut organik yang diperlukan untuk mengelusi molekul tersebut.

Segala bahan non-polar inert yang dapat memenuhi syarat pengemasan dapat digunakan dalam kromatografi fasa terbalik. Kolom paling populer adalah rantai karbon oktadesil (C18) yang terikat pada silika (klasifikasi USP: L1). Tersedia 297 jenis kolom ini secara komersial.<ref><cite class="citation book" contenteditable="false">''USP Chromatographic Reagents 2007-2008: Used in USP-NF and Pharmacopeial Forum''. </cite>United States Pharmacopeia. 2007.</ref> Urutan berikutnya adalah kolom Si-C8 (L7 - 166 kolom), silika murni (L3 - 88 kolom), Si-siano (L10 - 73 kolom), dan Si-fenil (L11 - 72 kolom). Perlu dicatat bahwa C18, C8 dan fenil adalah resin yang didedikasikan khusus untuk fasa terbalik, sementara kolom siano dapat digunakan dalam mode fasa terbalik tergantung pada kondisi fasa gerak dan analitnya. Perlu dicatat bahwa tidak semua kolom C18 mempunyai sifat retensi yang identik. Gugus fungsi pada permukaan silika dapat bekerja dalam reaksi monomerik maupun polimerik dengan organosilan rantai pendek yang digunakan dalam tahapan menutup gugus silanol (''end-capping''). Meskipun secara keseluruhan mekanisme retensinya tetap sama, sedikit perbedaan kimia permukaan untuk fasa diam yang berbeda akan membuat perubahan dalam selektivitasnya.