[[Diagnosis banding]] untuk penyakit ini adalah penyakit[[mamilitis serupaherpes yangsapi]], diakibatkan oleh ''[[Bovinestomatitis herpesvirus|Bovinepapular herpesvirus-2sapi]]'', [[dermatofilosis]], [[dermatofitosis]], [[fotosensitisasi]], [[aktinomikosis]], [[aktinobasilosis]], [[urtikaria]], gigitan serangga, [[besnoitiosis]], [[nokardiasis]], [[demodikosis]], [[onkosersiasis]], dan [[cacar sapi]].{{sfn|OIE|2017|p=3}}{{sfn|OIE Manual|2021|p=3}} Diagnosis definitif LSD ditegakkan dengan pengujian laboratorium. Spesimen diambil melalui [[biopsi]] nodul kulit. Selain itu, darah dari hewan yang mengalami infeksi akut juga bisa diambil sebagai spesimen. Identifikasi virus untuk mendiagnosis LSD dilakukan dengan isolasi virus dan [[reaksi berantai polimerase]] (PCR). Kedua metode ini digunakan untuk mengonfirmasi kasus klinis dan memastikan seekor hewan tidak tertular penyakit sebelum dilalulintaskan. Di sisi lain, metode yang digunakan untuk mendeteksi respons imun yaitu uji netralisasi virus (VNT), uji antibodi fluoresens tidak langsung (IFAT), dan [[ELISA]].{{sfn|OIE Manual|2021|p=3}}
