DNA komplemen: Perbedaan antara revisi
Konten dihapus Konten ditambahkan
Tidak ada ringkasan suntingan Tag: BP2014 |
Tidak ada ringkasan suntingan Tag: BP2014 |
||
Baris 3:
==Sintesis==
Sintesis cDNA ini dilakukan dengan mengunakan [[enzim]] "[[reverse transcriptase]] dan [[primer]] [[oligo dT]] yang akan menempel pada daerah [[ekor poli A]] yang merupakan ciri khas dari mRNA sehingga semua [[mRNA]] akan ditranskrip menjadi cDNA untai pertama sehingga selanjutnya dapat dilakukan [[PCR]] untuk pengecekan<ref name="Allison"/>.
Dalam mensintesis cDNA total, diperlukan mRNA total sebagai
Setelah didapatkan mRNA murni, terdapat beberapa tahap dalam mensintesis cDNA total, tahap pertama adalah sintesis pita/ untaian pertama cDNA (first strand synthesis of cDNA). Dalam tahapan ini diperlukan enzim reverse transcriptase yang akan mengkatalisis sintesis pita tunggal DNA dari template mRNA dengan bantuan primer oligo (dT) yang akan menempel pada poli A ujung 3’ dari mRNA. Kemudian, mRNA didegradasi dengan menggunakan ribonuklease atau larutan basa. Tahapan kedua adalah sintesis pita/ untaian kedua cDNA (second strand synthesis of cDNA). Tahapan ini menggunakan metode self-priming yaitu menggunakan primer yang berasal dari dirinya sendiri. Terdapat 2 enzim yang berperan, yaitu enzim DNA polimerase I (Klenow fragment) dan S1 nuklease. Enzim DNA polymerase I merupakan enzim yang memiliki aktivitas 5’ – 3’ polymerase dan 3’ – 5’ eksonuklease, enzim ini akan mensintesis second strand dari ujung 3’ menggunakan hairpin yang terbentuk secara alami dari first strand sebagai primer, kemudian hairpin tersebut akan dipotong menggunakan S1 nuklease, sehingga menghasilkan cDNA beruntai ganda (Allison 2007).
| |||