Gen reporter: Perbedaan antara revisi
Konten dihapus Konten ditambahkan
Tidak ada ringkasan suntingan Tag: BP2014 |
Tidak ada ringkasan suntingan Tag: BP2014 |
||
Baris 16:
= Contoh =
Contoh gen reporter adalah ''[[gfp]]'', ''lac''Z, dan ''cat''.<ref name="Muller & Oehler 2013">Müller-Hill B, Oehler S. 2013. ''The Lac Operon: A Short History of a Genetic Paradigm''. Berlin: Walter De Gruyter.</ref> Mekanisme kerja dari gen [[lacZ]] adalah menghasilkan [[enzim]] [[β-galaktosidase]], yang akan memecah [[laktosa]] dan [[X-gal]].<ref name="Muller & Oehler 2013" /> Koloni yang memecah X-gal akan berwarna biru, sehingga gen ini dapat digunakan untuk [[seleksi biru putih]].<ref name="Muller & Oehler 2013" /> Gen cat mengkodekan enzim [[Chloramphenicol Acetyl Transferase (CAT)]].<ref name="Acton"></ref> Deteksi dapat dilakukan dengan memberikan substrat berupa [[kloramfenikol|chloramphenicol]] yang terikat [[fluorophore]].<ref name="Acton"></ref> Bila koloni tersebut dapat memecah substrat, akan timbul pendaran dari fluorophore yang terlepas.<ref name="Acton">Acton QA. 2013. ''Luminescent Proteins—Advances in Research and Application''. Atlanta : ScholarlyEditions.</ref>
== Aplikasi ==
Salah satu contoh aplikasi gen reporter adalah dalam pembuatan plasmid vektor kloning pGEM-T.<ref name="Rampal">Rampal JB. 2007. ''Microarrays''. Totowa : Humana.</ref> Vektor pGEM-T memiliki promotor RNA polymerase T7 dan SP6.<ref name="Rampal"></ref> Plasmid ini juga memiliki daerah multiple cloning site di antara gen penyandi peptida α dari enzim β-galaktosidase, sehingga dapat dilaksanakan seleksi biru putih untuk indikator keberhasilan kloning.<ref name="Rampal"></ref> Pada bagian 3’ ada deoksitimidin yang membantu ligasi dari produk PCR dengan ujung 3’ deoksiadenosin yang akan ditambahkan saat amplifikasi dengan PCR oleh enzim Taq DNA polymerase.<ref name="Rampal"></ref> Vektor ini digunakan karena dapat memudahkan seleksi sel yang berhasil dikloning atau tidak dengan seleksi biru putih. <ref name="Fayyaz">Fayyaz P. 2008. ''Effects of Salt Stress on Ecophysiological and Molecular Characteristics of Populus Euphratica Oliv., Populus X Canescens (Aiton) Sm. and Arabidopsis Thaliana L''. Gottingen : Cuvillier.</ref>
= Rujukan =
| |||