Gen reporter: Perbedaan antara revisi

Gen reporter memiliki peran dalam berbagai penelitian biologi dan dapat memberikan evaluasi kualitatif maupun kuantitatif dari aktivitas suatu gen <ref name="Anson">Anson DS. 2007. ''Reporter Genes: A Practical Guide''. Totowa : Humana.</ref>

Penggunaan gen reporter untuk [[sel]] [[mamalia]] pertama kali digunakan pada tahun 1982.<ref name="Makrides"/> Pada penelitian tersebut digunakan [[vektor]] [[plasmid]] yang berisi gen pengkode enzim bakteri β-galaktosidase untuk mempelajari [[regulasi gen]] [[eukariot]].<ref name="Makrides">Makrides SC. 2003. ''Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells''. Danver : Elsevier.</ref>

Syarat suatu gen untuk dipilih menjadi gen reporter, yaitu harus menunjukkan [[fenotipe]] yang tidak ditunjukkan [[inang]] pada umumnya.<ref name="Brown"/> Fenotipe yang ditunjukkan juga harus mudah dideteksi.<ref name="Brown"/> Cara analisis gen ini dapat dilakukan dengan cara melihat [[ekspresi]] dan [[delesi]] dari gen tersebut.<ref name="Brown">Brown TA. 2013. ''Gene Cloning and DNA Analysis: An Introduction''. Hoboken : John Wiley & Sons.</ref> Gen ini juga tidak boleh menimbulkan sifat racuntoksik bagi inangnya. <ref name="Makrides"/>

=== Berdasarkan Tujuantujuan Investigasiinvestigasi ===

Biasanya akan dibentuk 2 tipe [[konstruksi gen]], yaitu [[fusi gen]] dan [[fusi protein]]. <ref name="Makrides"/> Fusi gen adalah penyisipan gen reporter ke sekuens umum yang mengatur ekspresi gen reporter tersebut. <ref name="Makrides"/> Fusi protein berarti penyisipan gen penyandi pada suatu sekuens sehingga dapat dihasilkan [[protein ''chimeric'']] yang berperan sebagai reporter. <ref name="Makrides"/> Kedua tipe konstruksi ini tetap berbasis penyandian gen reporter. <ref name="Makrides"/> Yang membedakan keduanya adalah tipe ekspresi gen yang diukur. <ref name="Makrides"/>

Contoh gen reporter adalah ''[[gfp]]'', ''lac''Z, dan ''cat''.<ref name="Muller & Oehler 2013">Müller-Hill B, Oehler S. 2013. ''The Lac Operon: A Short History of a Genetic Paradigm''. Berlin: Walter De Gruyter.</ref> Mekanisme kerja dari gen [[lacZ]] adalah menghasilkan [[enzim]] [[β-galaktosidase]], yang akan memecah [[laktosa]] dan [[X-gal]].<ref name="Muller & Oehler 2013" /> Koloni yang memecah X-gal akan berwarna biru, sehingga gen ini dapat digunakan untuk [[seleksi biru putih]].<ref name="Muller & Oehler 2013" /> Gen cat mengkodekan enzim [[Chloramphenicol Acetyl Transferase (CAT)]].<ref name="Acton"/> Deteksi dapat dilakukan dengan memberikan substrat berupa [[kloramfenikol|chloramphenicol]] yang terikat [[fluorophore]].<ref name="Acton"/> Bila koloni tersebut dapat memecah substrat, akan timbul pendaran dari fluorophore yang terlepas.<ref name="Acton">Acton QA. 2013. ''Luminescent Proteins—Advances in Research and Application''. Atlanta : ScholarlyEditions.</ref>

Salah satu contoh aplikasi gen reporter adalah dalam pembuatan [[plasmid]] [[vektor kloning]] [[pGEM-T]].<ref name="Rampal">Rampal JB. 2007. ''Microarrays''. Totowa : Humana.</ref> Vektor pGEM-T memiliki promotor RNA polymerase T7 dan SP6.<ref name="Rampal"/> Plasmid ini juga memiliki daerah ''[[multiple cloning site]]'' di antara gen penyandi [[peptida α]] dari enzim [[β-galaktosidase]], sehingga dapat dilaksanakan [[seleksi biru putih]] untuk indikator keberhasilan kloning.<ref name="Rampal"/> Pada bagian 3’ ada [[deoksitimidin]] yang membantu ligasi dari produk PCR dengan ujung 3’ [[deoksiadenosin]] yang akan ditambahkan saat amplifikasi dengan [[PCR]] oleh enzim [[Taq DNA polymerase]].<ref name="Rampal"/> Vektor ini digunakan karena dapat memudahkan seleksi sel yang berhasil dikloning atau tidak dengan seleksi biru putih. <ref name="Fayyaz">Fayyaz P. 2008. ''Effects of Salt Stress on Ecophysiological and Molecular Characteristics of Populus Euphratica Oliv., Populus X Canescens (Aiton) Sm. and Arabidopsis Thaliana L''. Gottingen : Cuvillier.</ref>