Gen reporter: Perbedaan antara revisi

Jelajahi riwayat secara interaktif

← Revisi sebelumnya

Konten dihapus Konten ditambahkan

VisualTeks wiki

Revisi per 31 Maret 2014 22.02 sunting Medelam (bicara \| kontrib) Pengecualian blokir IP, Peninjau, Pengembali revisi 292.817 suntingan kTidak ada ringkasan suntingan ← Revisi sebelumnya		Revisi terkini sejak 22 Desember 2022 05.28 sunting balikkan Arya-Bot (bicara \| kontrib) Bot, Pengecualian blokir IP 261.428 suntingan k →Berdasarkan tujuan investigasi: clean up Tag: AWB
(26 revisi perantara oleh 7 pengguna tidak ditampilkan)
Baris 1: [[Berkas:Reporter gene.png\|jmpl\|295px\|Sebuah gambaran bagaimana gen reporter dapat menjadi suatu marka.]] ~~{{inuseBP\|BP61Marco\|15 Mei 2014\|31 Maret 2014}}~~ '''Gen reporter''' adalah [[gen]] yang digunakan sebagai [[indikator]] untuk membedakan [[organisme]] yang berhasil ~~ditransformasi~~di[[transformasi]], dapat juga digunakan sebagai indikator keberhasilan [[kloning]].<ref name="Anson"/>▼ ~~{{Tanpa referensi\|date=April 2014}}<!-- setiap kalimt harus diberikan rujukan/referensi-->~~ Gen reporter memiliki peran dalam berbagai penelitian biologi dan dapat memberikan evaluasi kualitatif maupun kuantitatif dari aktivitas suatu gen <ref name="Anson">Anson DS. 2007. ''Reporter Genes: A Practical Guide''. Totowa: Humana.</ref> ▲'''Gen reporter''' adalah [[gen]] yang digunakan sebagai indikator untuk membedakan [[organisme]] yang berhasil ditransformasi, dapat juga digunakan sebagai indikator keberhasilan [[kloning]]. == ~~Syarat Gen Reporter~~Sejarah == Penggunaan gen reporter untuk [[sel]] [[mamalia]] pertama kali digunakan pada tahun 1982.<ref name="Makrides"/> Pada penelitian tersebut digunakan [[vektor]] [[plasmid]] yang berisi gen pengkode enzim bakteri β-galaktosidase untuk mempelajari [[regulasi gen]] [[eukariot]].<ref name="Makrides">Makrides SC. 2003. ''Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells''. Danver: Elsevier.</ref> == Syarat == Syarat suatu gen ~~reporter~~ untuk dipilih menjadi gen reporter, yaitu harus menunjukkan [[fenotipe]] yang tidak ditunjukkan [[inang]] pada umumnya.<ref name="Brown"/> Fenotipe yang ditunjukkan juga harus mudah dideteksi.<ref name="Brown"/> Cara analisis gen ini dapat dilakukan dengan cara melihat [[ekspresi]] dan [[delesi]] dari gen tersebut.<ref name="Brown">[Brown TA. 2013. ''Gene Cloning and DNA Analysis: An Introduction''. Hoboken : John Wiley & Sons.]</ref> Gen ini juga tidak boleh menimbulkan sifat toksik bagi inangnya.<ref name="Makrides"/> == ~~Contoh Gen Reporter~~Klasifikasi == === Berdasarkan tujuan investigasi === Contoh gen reporter adalah ''[[gfp]]'', ''lac''Z, dan ''cat''. Mekanisme kerja dari gen [[lacZ]] adalah menghasilkan [[enzim]] [[β-galaktosidase]], yang akan memecah [[laktosa]] dan [[X-gal]]. Koloni yang memecah X-gal akan berwarna biru, sehingga gen ini dapat digunakan untuk [[''blue-white screening'']].<ref name=Muller & Oehler 2013>[Müller-Hill B, Oehler S. 2013. ''The Lac Operon: A Short History of a Genetic Paradigm''. Berlin : Walter De Gruyter.]</ref> Gen cat mengkodekan enzim [[Chloramphenicol Acetyl Transferase (CAT)]]. Deteksi dapat dilakukan dengan memberikan substrat berupa [[kloramfenikol\|chloramphenicol]] yang terikat [[fluorophore]]. Bila koloni tersebut dapat memecah substrat, akan timbul pendaran dari fluorophore yang terlepas.<ref name="Acton">[Acton QA. 2013. ''Luminescent Proteins—Advances in Research and Application''. Atlanta : ScholarlyEditions.]</ref>▼ Biasanya akan dibentuk 2 tipe [[konstruksi gen]], yaitu [[fusi gen]] dan [[fusi protein]].<ref name="Makrides"/> Fusi gen adalah penyisipan gen reporter ke sekuens umum yang mengatur ekspresi gen reporter tersebut.<ref name="Makrides"/> Fusi protein berarti penyisipan gen penyandi pada suatu sekuens sehingga dapat dihasilkan [[protein ''chimeric'']] yang berperan sebagai reporter.<ref name="Makrides"/> Kedua tipe konstruksi ini tetap berbasis penyandian gen reporter.<ref name="Makrides"/> Yang membedakan keduanya adalah tipe ekspresi gen yang diukur.<ref name="Makrides"/> == ~~Rujukan~~Contoh == ▲Contoh gen reporter adalah ''[[gfp]]'', ''lac''Z, dan ''cat''.<ref name="Muller & Oehler 2013">Müller-Hill B, Oehler S. 2013. ''The Lac Operon: A Short History of a Genetic Paradigm''. Berlin: Walter De Gruyter.</ref> Mekanisme kerja dari gen [[lacZ]] adalah menghasilkan [[enzim]] [[β-galaktosidase]], yang akan memecah [[laktosa]] dan [[X-gal]].<ref name="Muller & Oehler 2013" /> Koloni yang memecah X-gal akan berwarna biru, sehingga gen ini dapat digunakan untuk [[~~''blue-white~~seleksi biru ~~screening''~~putih]].<ref name="Muller & Oehler 2013~~>[Müller-Hill B, Oehler S. 2013. ''The Lac Operon: A Short History of a Genetic~~" ~~Paradigm''. Berlin : Walter De Gruyter.]<~~/~~ref~~> Gen cat mengkodekan enzim [[Chloramphenicol Acetyl Transferase (CAT)]].<ref name="Acton"/> Deteksi dapat dilakukan dengan memberikan substrat berupa [[kloramfenikol\|chloramphenicol]] yang terikat [[fluorophore]].<ref name="Acton"/> Bila koloni tersebut dapat memecah substrat, akan timbul pendaran dari fluorophore yang terlepas.<ref name="Acton">[Acton QA. 2013. ''Luminescent Proteins—Advances in Research and Application''. Atlanta : ScholarlyEditions.]</ref> ~~<references />~~ == Aplikasi == Salah satu contoh aplikasi gen reporter adalah dalam pembuatan [[plasmid]] [[vektor kloning]] [[pGEM-T]].<ref name="Rampal">Rampal JB. 2007. ''Microarrays''. Totowa: Humana.</ref> Vektor pGEM-T memiliki promotor RNA polymerase T7 dan SP6.<ref name="Rampal"/> Plasmid ini juga memiliki daerah ''[[multiple cloning site]]'' di antara gen penyandi [[peptida α]] dari enzim [[β-galaktosidase]], sehingga dapat dilaksanakan [[seleksi biru putih]] untuk indikator keberhasilan kloning.<ref name="Rampal"/> Pada bagian 3’ ada [[deoksitimidin]] yang membantu ligasi dari produk PCR dengan ujung 3’ [[deoksiadenosin]] yang akan ditambahkan saat amplifikasi dengan [[PCR]] oleh enzim [[Taq DNA polymerase]].<ref name="Rampal"/> Vektor ini digunakan karena dapat memudahkan seleksi sel yang berhasil dikloning atau tidak dengan seleksi biru putih.<ref name="Fayyaz">Fayyaz P. 2008. ''Effects of Salt Stress on Ecophysiological and Molecular Characteristics of Populus Euphratica Oliv., Populus X Canescens (Aiton) Sm. and Arabidopsis Thaliana L''. Gottingen: Cuvillier.</ref> == Lihat pula ==▼ = Rujukan = {{Reflist}} ▲== Lihat pula == * [[DNA]] * [[Genetika]] * [[Genotipe]] * [[Mutasi]] [[Kategori:Gen\| ]]